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細胞培養過程中出現支原體污染,該怎么辦?

更新時間:2022-02-23點擊次數:2260

細胞培養過程中出現支原體污染,該怎么辦?

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謹記:對抗污染,預防大于一切!


細胞培養.png

在細胞培養過程中,很多小伙伴兒一直受到支原體污染的困擾,我自己養的細胞曾經也遇到過支原體污染,深受其害呀!針對于支原體污染來說,大家一定注意預防!如果已經發現了一絲絲污染跡象,就要做到早發現、早挽救!如果細胞能夠救回來,還是可以繼續實驗的,不耽誤實驗進度。不過,確實也很難*清除啊!如果說實在救不回來,那就再買一株新的細胞吧!最后,要買細胞的同學和老師,可以電話或郵箱聯系我們哦!

支原體污染對細胞培養造成多方面的不良影響,已經成為在細胞培養時的一個嚴重問題,嚴重干擾實驗結果的可信度。因此,定期進行支原體檢測和去除,確保無支原體存在細胞培養體系內才能獲得準確有效的實驗數據。

什么是支原體(Mycoplasma)

支原體是1898年Nocard等發現的一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物,能在無生命的人工培養基上生長繁殖,直徑50-300nm,能通過細菌濾器。過去曾稱之為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism,PPLO)。1967年正式命名為支原體。

支原體模式圖.jpg

支原體又稱霉形體,支原體細胞中可見的細胞器只有核糖體(支原體是原核細胞,原核細胞的細胞器只有核糖體)。支原體是目前發現的smallest、simplest的原核生物,可以輕松地通過濾膜,混入培養系統中,呈高度多形性,多數呈球形,也有桿形、絲狀、分支狀等多種形態。通常依附在細胞膜表面,支原體沒有剛性的細胞壁,因此普通的抗生素對它根本不起作用,實驗室常見的種類有:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。

支原體污染的后果

細菌和真菌造成的污染相對比較容易檢測、預防和去除,然而支原體造成的污染很難察覺,即使生長密度高達 10^7-10^9 CFU/mL,也很難有污染跡象(渾濁、pH變化等)。支原體污染后會導致細胞生長變慢,狀態變差,不會馬上使細胞致死,但會影響細胞內的各種參數,如改變細胞膜抗原性,改變細胞新陳代謝,干擾核酸的合成,改變 DNA 轉染效率,導致染色體畸變等。 

一階扇形圖.png

支原體污染來源

1. 工作環境的污染

2. 培養基或其他試劑的污染

3. 污染支原體的細胞造成的交叉污染

4. 實驗器材帶來的污染

5. 操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)

6. 用來制備細胞的原始組織或器官的污染。

細胞遇到支原體污染,該怎么辦?

1. 疑似支原體污染,可通過檢測來確認是否污染;

2. 經檢測沒有發現支原體污染,可采用支原體預防試劑,在平時實驗中做好環境和實驗用具的消毒工作;

3. 經檢測確為支原體污染,使用支原體去除試劑進行挽救;如果救不回來的,只能重新復蘇一管或者引進新的細胞;如果能夠挽救回來,后續實驗中要定期采用支原體預防試劑,避免支原體的污染。



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